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细胞周期检测

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细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法,但它不能代表细胞群体的周期,故现多采用其他方法测群体周期测定细胞周期的方法很多,最常用的是PI渗入测定细胞周期。PI ,即碘化丙锭,可以与细胞内DNA 和RNA 结合,采用RNA酶将RNA消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的 G0/G1 期具有二倍体细胞的DNA含量(2N) ,而G2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。因此,通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA 含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为 G0/G1 期,S 期和G2/ M 期,并可通过特殊软件计算各时相的百分率。

应用实例

分别将阴性对照靶点和目的基因有效靶点慢病毒感染细胞,继续培养四天后,洗涤消化并用预冷的70% 乙醇溶液固定细胞,1h后,PI染色,流式细胞仪检测,得到的周期实验结果如下:

实验结论:感染目的基因靶点病毒后,细胞处于G1期的细胞显著增加,处于S期的细胞显著减少,提示目的基因与细胞的周期分布显著相关。

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