服务热线:18616635231

技术服务

软琼脂成瘤实验

产品介绍【返回】

软琼脂原理:
细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数,但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,一般初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强;正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系,做克隆形成率测定时,接种细胞一定要分散成单细胞悬液,直接接种在碟皿中,持续一周,随时检查,到细胞形成克隆时终止培养。
软琼脂基本步骤:
(1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活细胞计数,用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。

(2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液,高压灭菌后,维持在40℃中不会凝固。

(3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后,取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7~10mL),冷却凝固,可作底层琼脂置CO2温箱中备用。

(4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2×DMEM培养基在无菌试管中相混以后,再向管中加入0.2mL的细胞悬液,充分混匀,注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中,逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后,置入37℃ 5%CO2温箱中培养10~14天。

(5)把平皿放置在倒置显微镜下,观察细胞克隆数。计算形成率。

软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时,琼脂温度不宜超过40℃。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个,一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖,不适用于软琼脂克隆形成试验。

软琼脂克隆图实例:

点击关闭

  • 微博

    微信
关于我们
公司动态
细胞产品
建系细胞
原代细胞
实验用干细胞
质粒,载体
感受态细胞
试剂耗材
细胞培养试剂
胎牛血清Gibco,Hyclone,sigma
支原体检测与清除
试剂盒
外泌体研究
核酸提取
PCR及RT-PCR产品
抑制剂
其他
克隆载体及其相关产品
电泳相关产品
蛋白质研究相关
仪器设备
细胞电穿孔仪
离心机
移液器
耗材
技术服务
分子生物学技术服
细胞生物学技术服务
蛋白相关技术服务
病毒类技术服务
动物实验类技术服务
组织形态学技术服务
实验经验交流
联系我们
公司简介
联系方式
采购平台与展示渠道
人才招聘
安徽快三 广西快三 安徽快3 安徽快3官网 安徽快3精准计划 广东快乐十分 安徽快3官网 安徽快三 广东快乐十分 广东快乐十分