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wound healing实验

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细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低,可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。
 
实验内容:
材料:6 孔板(其他多孔板亦可,但6孔较好,大小适中)、marker笔、直尺、20微升枪头(灭菌)、无血清培养基、PBS
步骤:所有操作器械都要提前灭菌,直尺和marker笔在操作前用紫外照射30min(超净台内)

1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2.在孔中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞大小及特性的不同来设定,掌握为过夜能铺满孔板为宜。

3.第二天用枪头比着直尺进行划痕,直尺尽量垂直于背后的横线,枪头要垂直,不能倾斜。

4.用PBS洗3次,去除划落的细胞,然后加入无血清培养基。

5.放入37度5% CO2培养箱中进行培养。之后按0,6,12,24小时取样,拍照。
 
注意事项:

1. 一般做划痕实验,都是在无血清或者低血清状态下培养的,否则细胞本身的增殖情况就不能忽略。
 
2. 按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,这就解决了前后观察时位置不固定的问题。

实验图实例:

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